viernes, 1 de abril de 2011

Recuento Diferencial

¿Qué es el recuento diferencial?

El recuento diferencial de leucocitos es una parte rutinaria de la biométrica hemática que puede ser útil en la valoración de una infección o inflamación, en la determinación de los defectos de intoxicación posible por sustancias químicas o drogas, en el monitoreo de trastornos sanguíneos como la leucemia, y en los efectos secundarios de tratamientos como la quimioterapia.

El conteo de glóbulos blancos puede indicar enfermedades infecciosas e inflamatorias, leucemia, linfoma y trastornos de la médula ósea.


Hay varios tipos de glóbulos blancos (GB) que normalmente se encuentran en la sangre: Neutrófilos (leucocitos polimorfonucleares; células en banda (neutrófilos ligeramente inmaduros), linfocitos tipo T (células T), linfocitos tipo B (células B), monocitos, eosinófilos y basófilos. Los linfocitos T y B no se distinguen entre sí en una preparación normal de un portaobjeto.





Valores Normales
Los valores normales expresados en porcentajes son los siguientes:
  • Neutrófilos 60-70%,
  • Eosinófilos 2-4%,
  • Basófilos 0,5-1%,
  • Linfocitos 20-25%
  •  Monocitos 3-8%.

Forma en que se realiza el examen
El procedimiento consta de una toma de sangre, la misma se disemina en un portaobjetos de vidrio y luego se tiñe. A continuación se determina el porcentaje de cada tipo de leucocitos.

Frotis Sanguíneo
Una extensión o frotis sanguíneo consiste en recubrir parcialmente un porta con una gota de sangre, de tal manera que las células de ésta se dispongan formando una sola capa de ellas. Esto puede hacerse manual o automáticamente. Lo último se realiza mediante un aparato (spinner) que cen­trifuga rápidamente el porta con la sangre depositada en su centro. Con este aparato se obtienen unos frotis que presentan una distribución celular muy homogénea.

PARTES DE UNA EXTENSIÓN.

1.CABEZA.

·         Es la zona inicial de la extensión.
·         Es la región más gruesa.
·         En ella se encuentra una mayor proporción de linfocitos, y los hematíes forman aglomerados (pilas de monedas).
2. CUERPO.
·         Es la zona media del frotis.
·         Su espesor es el apropiado.
·         En ella existe una adecuada proporción entre los distintos tipos de leucocitos.
·         Contiene la "zona ideal" de observación, que corresponde a la porción que limita con la cola.
3. COLA.
·         Es la zona final de la extensión.
·         Suele tener un aspecto redondeado.
·         Es la región más fina.
·         En ella se encuentra una mayor proporción de leucocitos grandes (granulocitos y monocitos), y además. los hematíes están deformados y presentan una tonalidad uniforme.
·         En su porción terminal suelen ser más abundantes las plaquetas, sobre todo si son grandes.

4. BORDES.
·         Contienen una mayor proporción de leucocitos grandes.
Si están deshilachados, en ellos las células son difíciles de reconocer por estar deformadas o destruidas

CARACTERÍSTICAS DE UNA BUENA EXTENSIÓN.

·         La cabeza ha de estar cerca de uno de los extremos del porta.
·         La cola debe estar cercana al otro extremo del porta, pero sin llegar a él.
·         El borde de la cola tiene que estar finamente deshilachado. Ese fino deshilachamiento recibe el nombre de "barbas".
·         Toda la extensión ha de ser fina y homogénea.
·         Los bordes laterales de la extensión deben estar separados de los bordes del porta por 1 mm aproximadamente.
·         Una extensión normal ha de tener una longitud de las ¾ partes del portaobjetos.
·         El uso de teñidores automáticos exige la realización de extensiones más cortas que las consideradas normalmente como correctas (con una longitud de la mitad del portaobjetos).










REALIZACIÓN DE UNA EXTENSIÓN SANGUÍNEA.

Las extensiones sanguíneas se llevan a cabo deslizando un porta sobre otro en el que se ha depositado pre­viamente una gota de sangre. Con esto se obtiene una fina capa de células sanguíneas que puede ser adecuadamente observada con el microscopio.

Material necesario

·         Una lanceta de aplicación manual o automática (por ejemplo, la del sistema Glucolet® de los laboratorios Ames).
·         Algodón.
·         Un capilar no heparinizado, si la muestra es sangre venosa anticoagulada, o heparinizado, si la muestra es sangre capilar.
·         2 portas limpios y libres de grasa. Uno de ellos puede ser normal y el otro ha de ser, preferentemente. esmirilado y biselado (el porta extensor). Para mantener limpios los portas, se deben seguir las siguientes indicaciones:
Lavar los portas con agua y jabón líquido. Aclararlos con abundante agua caliente. Sumergir los portas, durante una hora en una solución de etanol- éter etílico o, simplemente etanol. Volver a aclarar los portas y dejar secar. Por último recordar que siempre debemos tocar los portas por los bordes, de esta forma evitamos manchar las superficies de los mismos con suciedad o grasa procedente de los dedos.
·         Guantes desechables.
·         Un rotulador de vidrio.

Reactivos
·         Un desinfectante: alcohol etílico (etanol) de 70°, o mejor aún, solución alcohólica de povidona yodada.
·         Solución de etanol-eter etílico en una proporción de 50:50.

Muestra

·         Sangre capilar no anticoagulada o sangre venosa adecuadamente anticoagulada. La forma correcta de extraer sangre capilar es la siguiente:
Elegir el tercer o cuarto dedo de una de las manos. Desinfectar el pulpejo del dedo selecciondo con un algodón embebido en un desinfectante apropiado. Dejar que el desinfectante se evapore.
Con una lanceta, pinchar firme y rápidamente una cara lateral de este pulpejo. Tras lo anterior con un algodón seco retiramos la primera gota emitida. Presionamos el extremo del dedo, a nivel del lado opuesto al de la punción, hasta obtener la cantidad de sangre deseada. Por último, tapamos el pulpejo con una tirita.

La sangre venosa tiene que haber sido extraída hace menos de 3 horas, ya que pasado este tiempo, se producen unos cambios apreciables en las células, que se manifiestan, al ser teñidas éstas, como alteraciones en su morfología.
Una vez extraída, la sangre venosa ha de ser anticoagulada con EDTA. Para realizar frotis sanguíneos no debe utilizarse sangre anticoagulada con heparina, ya que ésta agrega las células y produce un fondo azul en las extensiones de sangre teñidas con el colorante de Wright.
·         Hay que tener en cuenta que la sangre capilar contiene más hematíes y leucocitos y menos plaquetas que la sangre venosa.

Técnica
·      Con los dedos índice y pulgar de una mano, sujetar un extremo del porta normal (porta soporte), a nivel de sus bordes, y situarlo sobre una mesa. También puede apoyarse, simplemente, el porta soporte sobre el extremo del dedo corazón de la mano que lo sujeta. De esta forma, el porta soporte forma un ángulo con la mesa.
·         Con un capilar cargado mediante capilaridad de sangre problema, depositar una pequeña gota de ésta (de unos 5 microlitros) en la cara superior de ese porta, a no menos de 2 cm del extremo opuesto al que agarra la mano.
·         Colocar un extremo del porta esmerilado (porta difusor o extensor) un poco por delante de la gota de san­gre y formando un ángulo de 45° con el porta soporte. Es conveniente utilizar siempre el mismo porta extensor, para adaptarlo a esta función.
·         Desplazar suavemente hacia atrás el porta extensor, hasta que alcance la gota de sangre.
·         Dejar que la gota se extienda, por capilaridad, a lo largo del extremo del porta extensor que toca el porta soporte.
·         Antes de que la sangre alcance los bordes de ese extremo, deslizar el porta extensor hacia delante, con un movimiento firme y uniforme, y a una velocidad media. Este deslizamiento debe acabar, aproximadamente, a 1 cm del extremo final del porta soporte, con un movimiento de ascensión del porta extensor.
·         Secar rápidamente la extensión, agitándola al aire, para que sus células no se distorsionen.
·         Escribir el nombre del enfermo, en el porta que soporta la extensión.



 
TINCIÓN DE WRIGHT.

Fundamento

El colorante utilizado es una solución de eosina y una mezcla de azul de metileno (del 50 al 75%) y azur B (del 10 al 25%) junto con otros derivados del alcohol metílico.
Dada la presencia de metanol en la composición del colorante, no es necesario un paso previo de fijación antes de la coloración.
Sólo si se van a guardar las extensiones sin teñir de un día para otro precederemos a su fijación para evitar el deterioro del frotis.

Material necesario

·         Microscopio óptico.
·         Cristalizador.
·         Puentes de tinción.
·         Pipetas Pasteur con chupete.
·         Frasco lavador.
·         Guantes.
·         Tubos de ensayo.

Reactivos
·         Solución de eosina-azul de metileno según Wright.
·         Solución tampón pH 7,2.
·         Aceite de inmersión.

Muestra
Sangre capilar fresca o venosa anticoagulada. Los anticoagulantes más adecuados son la heparina y el EDTA.

Técnica

·         Realizar un frotis sanguíneo muy fino. Dejar secar al aire.
·         Sobre la extensión colocada horizontalmente en el puente de tinción verter 1 ml de eosina-azul de metileno. Dejamos actuar un minuto y lavamos con solución tampón pH 7,2. Dejamos escurrir y secar en posición vertical.
·         Inmediatamente antes de su empleo y en un tubo de ensayo, diluimos 0,5 ml. de eosina-azul de metileno con 0,5 ml de solución tampón pH 7,2. Mezclamos bien y cubrimos con esta dilución la extensión. Teñimos durante 3-5 minutos y lavamos con agua del grifo. Volvemos a lavar con solución tampón pH 7,2. Dejamos escurrir y secar en posición vertical.

Factores que pueden afectar el examen:
El estrés emocional o físico puede aumentar el conteo de glóbulos blancos (GB).
Cualquier infección o estrés agudo puede aumentar la producción de GB. Esto por lo general conlleva a un aumento en el número de células y a un incremento del porcentaje de células inmaduras (principalmente células en banda). Este cambio se llama "desplazamiento hacia la izquierda". Las personas que han tenido una esplenectomía tienen una persistente elevación moderada de los GB.
Algunas de las drogas que pueden incrementar el conteo de GB son: epinefrina, alopurinol, aspirina, cloroformo, heparina, quinina, corticosteroides y tramtireno.
Algunas de las drogas que pueden disminuir los conteos de GB son: antibióticos, anticonvulsionantes, antihistamínicos, medicamentos antitiroideos, arsénicos, barbitúricos, agentes quimioterapéuticos, diuréticos y sulfonamidas.

  
Significado de los resultados anormales:
Un conteo bajo de GB (leucopenia) puede indicar: insuficiencia de la médula ósea (por ejemplo, debido a granuloma, tumor, fibrosis), presencia de sustancia citotóxica, enfermedades vasculares del colágeno (como lupus eritematoso) enfermedad del hígado o bazo radiación.
Un conteo alto de GB (leucocitosis) puede indicar: enfermedades infecciosas, enfermedad inflamatoria (como artritis reumatoide o alergia) leucemia, estrés emocional o físico severo daño tisular (por causas como quemaduras).




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2 comentarios:

  1. Esta muy completa su información =)

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  2. Muy bien jovenes. Muy completo su resumen.
    No reflexionaron sobre el uso de las Tic´s
    Sonia

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